審計追蹤液相色譜的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)介紹

　　審計追蹤液相色譜的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)介紹
　　液質(zhì)聯(lián)用，即審計追蹤液相色譜 -質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，是目前很好的檢測技術(shù)，以其快速的分離能力、超高的靈敏度著稱.本文將介紹液質(zhì)聯(lián)用法的原理,優(yōu)點,分離方法以及應(yīng)用，對于想要發(fā)高分文章，希望自己的數(shù)據(jù)被認可的客戶，可以了解一下。
　　液質(zhì)聯(lián)用的原理：
　　液質(zhì)聯(lián)用是以審計追蹤液相色譜為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)。樣品經(jīng)過審計追蹤液相色譜分離后，流動相分流進入質(zhì)譜儀，在離子源被電離，產(chǎn)生帶有一定電荷、質(zhì)量數(shù)不同的離子。質(zhì)譜儀依據(jù)不同離子在電磁場中的運動行為不同來檢測各個離子，根據(jù)每一個離子的質(zhì)荷比（質(zhì)量與電荷數(shù)比值）不同，顯示在色譜圖上，后通過對色譜圖的分析，得到樣品的檢測數(shù)據(jù)。
　　液質(zhì)聯(lián)用法對于樣品的要求：
　　同任何其他分析方法一樣，樣品前處理在LC-MS分析中是重中之重的。對所用樣品，無論是什么類別，都有如下要求：
　　樣品清潔，盡量不含雜質(zhì)，由于蛋白質(zhì)和肽類在ESI上有很強的響應(yīng)，這兩樣化合物尤其要注意；
　　樣品不宜含有高濃度的難揮發(fā)酸（磷酸，硫酸等）及其鹽，這些會引起液質(zhì)聯(lián)用儀很強的噪聲；
　　為了防止堵塞柱子、噴口及毛細管入口，樣品的粘度不要太大。
　　液質(zhì)聯(lián)用法用于樣品分離的常用方法：
　　1.固相萃取（SPE）
　　這是應(yīng)用廣泛的處理樣品的方法，固定相是吸附劑，流動相是萃取過程中的水樣。當固定相與流動相接觸時，其中的某些痕量物質(zhì)就保留在固定相中。這時用少量的選擇性溶劑洗脫，即可達到富集和純化目標物的目的。
　　分離方法的比較
　　方法優(yōu)點缺點
　　液液萃取法儀器設(shè)備簡單，應(yīng)用廣泛工作量大，溶劑消耗大，污染環(huán)境
　　蛋白沉淀操作簡單，儀器設(shè)備簡單檢測靈敏度低，非特異性沉淀
　　固相萃取回收率高，重現(xiàn)性好。需要建立方法，成本較高
　　2.阻定性進入介質(zhì)：
　　阻定性進入介質(zhì)（restricted access media，RAM)有兩層不同的表面，即外層表面與內(nèi)層表面，外層表面通過體積排除作用僅允許小分子進入內(nèi)層表面。內(nèi)層表面通過傳統(tǒng)的分配作用“捕獲”被分析物。RAM介質(zhì)常用于在大分子共存時小分子樣品的分離和富集.可有效地除去血液和尿液中的基質(zhì)。
　　3.灌注固相萃取：
　　灌注填料是近些年才出現(xiàn)的一種填料，顆粒上同時有貫通型的孔以及擴散型的穴。這種填料制成的固相萃取用品或液相柱，可以以每min幾十ml的速度上樣，用于諸如培養(yǎng)基中蛋白質(zhì)和肽類的分離、富集和脫鹽，具有不可比擬的優(yōu)勢。
　　4.超濾：
　　超濾（ultrafiltration)是一種加壓膜分離技術(shù)，小分子溶質(zhì)和溶劑在一定壓力下，穿過一定孔徑的特制的薄膜，過濾了大分子物質(zhì)，從而達到純化大分子物質(zhì)的目的。具有操作簡便，成本低廉，條件溫和等眾多優(yōu)勢，但不能用于蛋白溶液。
　　5.免疫親和萃取：
　　免疫親和萃取是基于固相化的配基（抗體）和樣品之間的相互作用的樣品前處理方法，具有分離效率高、專屬性高等優(yōu)點。其原理是分析物（抗原）結(jié)合特異性抗體，可以通過不同于樣品溶液PH或離子強度的緩沖液洗脫而達到分離和純化的目的。